
手工固相多肽合成所需試劑和耗材(的內(nèi)容如下)
一、器材
反應(yīng)管、多胎合成振蕩器、多孔加熱器、真空泵、洗瓶(六個(gè))、微型試管
二、檢測(cè)試劑
a.茚三酮、KCN、苯酚
b.乙醛、對(duì)四氯苯醌(C6O2Cl4)
三、縮合
a.HBTU、NMM(N-甲基嗎啡啉)
b.HOBt、DIC
四、洗、溶劑
DMF、DCM、甲醇、乙醇
五、脫保護(hù)
哌啶(20%)/DMF
六、裂解劑
TFA、EDT、TIS、苯甲硫醚
七、結(jié)第一個(gè)氨基酸殘基
乙酸酐、吡啶、DMAP
八、 樹脂和保護(hù)氨基酸
進(jìn)口wang樹脂和保護(hù)氨基酸
手工固相多肽合成操作步驟(的內(nèi)容如下)
一.樹脂溶漲
將樹脂放入反應(yīng)管中,加DMF(15ml/g),30min.
二.脫保護(hù)
去掉DMF,加20%哌啶DMF溶液(15ml/g),5min,去掉再加20%哌啶DMF溶液(15ml/g),15min.
三.檢測(cè)
抽掉哌啶溶液,取十幾粒樹脂,用乙醇洗三次,加入茚三酮,KC N,苯酚溶液各一滴,105℃-110℃加熱5min
四.洗
DMF(10ml/g)兩次,甲醇(10ml/g)兩次,DMF(10ml/g)兩次
五.縮合
方法a:保護(hù)氨基酸三倍過量,HBTU三倍過量,均用盡量少DMF溶解,加入反應(yīng)管,立刻假如NMM十倍過量.反應(yīng)30min.
方法b:保護(hù)氨基酸三倍過量,HOBt三倍過量,均用盡量少DMF溶解,加入反應(yīng)管,立刻假如DIC三倍過量.反應(yīng)30min.
六.洗
DMF(10ml/g)一次,甲醇(10ml/g)兩次,DMF(10ml/g)兩次
七. 重復(fù)二至六操作
八.最后一次洗滌
DMF(10ml/g)兩次,甲醇(10ml/g)兩次,DMF(10ml/g)兩次, DCM(10ml/g)兩次
九.裂解
配制裂解液(10ml/g) TFA 94.5%;水2.5%;EDT 2.5%;TIS 1%
120min (注:g是樹脂的單位級(jí))
十.吹干洗滌
將裂解液用氮?dú)獗M量吹干,用乙醚洗六次,然后常溫?fù)]干.